目的：采用超高液相色谱-串联质谱(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS) 建立16种氨基酸的定量方法，并对小鼠血浆以及尿液样本实现准确定量分析。方法：使用UPLC-MS技术，液相以20 mmol·L-1甲酸铵水溶液（A）以及乙腈（含15% 20 mmol·L-1甲酸铵水溶液）（B）为流动相进行梯度洗脱，质谱以多反应监测模式（multiple reaction monitoring, MRM）进行检测，以专属性、检测限、定量限、线性、准确度、精密度、残留效应以及稳定性等方法学指标评价此氨基酸定量方法，并应用于小鼠血浆以及尿液的氨基酸定量。结果：通过对氨基酸标准品的方法学验证，此检测方法符合方法学验证的相关标准。对小鼠的血浆以及尿液中氨基酸的准确定量结果表明，此方法可同时检测小鼠血浆以及尿液中的16种氨基酸并进行准确定量。结论：应用UPLC-MS技术，建立了能对小鼠血浆以及尿液中16种氨基酸准确定量的非衍生化方法，具有良好的精密度以及准确性等，为准确定量小鼠血浆以及尿液中的氨基酸提供了方法参考。