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神经营养素4前导序列
介导Exendin-4表达质粒的构建及鉴定%0 Journal Article %D 2012 %J 神经药理学报 %R %P 22-28 %V 2 %N 3 %U {http://actanp.hebeinu.edu.cn/CN/abstract/article_86.shtml} %8 2012-06-26 %X
目的：构建神经营养素4前导序列介导的可分泌表达Exendin-4的重组腺伴病毒载体，为探究Exendin-4用于2型糖尿病临床治疗提供实验基础。
方法：使用互补引物/模板法及Ｔ载体克隆法扩增Exendin-4的cDNA克隆，连接于NT4前导肽序列的3′端，融合基因NT4- Exendin-4亚克隆于穿梭质粒pSSHG，转染HEK-293细胞，包装病毒，斑点杂交方法测定重组病毒滴度。
结果：经酶切、测序证实克隆出Exendin-4 cDNA，成功构建同一开放读码框ORF的NT4前导肽-Exendin-4cDNA克隆，得到高滴度（2.5×10
9pfu·L
-1） 的重组腺相关病毒。
结论：通过分子克隆技术成功制备了Exendin-4的重组腺伴病毒载体pSSHG /NT4- Exendin-4并成功包装了较高浓度的重组病毒，为进一步研究Exendin-4功能及应用于临床打下基础。